製品の概要

当社が生産したDH 5α受容体細胞は大腸菌DH 5α株を用いて特殊な技術により調製し、DNAの化学転化に用いることができる。pUC 19プラスミドを用いて測定したところ、転化効率は108に達することができ、−70℃で3〜5ヶ月保存しても転化効率は変化しなかった。

遺伝子型：supE44△lacU169（φ80 lacZ△M15）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1

製品の特徴

プラスミド平板及び粘粒平板の組換え欠陥を舗装及び培養するための抑制型菌株。そのφ80 lacZ△M 15遺伝子の生成物はpUCベクターがコードするβ-ガラクトシダーゼアミノ末端とβ相補性を実現でき、青白斑スクリーニングに用いることができる。

操作方法（以下の操作はすべて無菌条件の基準に従って行う）

1、感受性細胞を氷の上に置いて溶解し、以下の実験は100 ul感受性細胞を例とする。

2、受容体細胞懸濁液に転化する目的DNAを添加し、目的DNAの体積が受容体細胞懸濁液の体積の10分の1を超えないように注意し、遠心管を軽く回転させて内容物を混合し、氷浴で30分間放置する。

3、遠心管を42℃の水浴中に60〜90秒間置き、それから急速に氷浴中に移して2〜3分間放置し、遠心管を揺動しないように注意する。

4、遠心管に500 ul無菌無抵抗のSOCまたはLB培地を添加し、37℃で180 rpm振動培養を1時間行った。目的はプラスミドに関連する耐性マーカー遺伝子を発現させ、菌体を蘇生させることである。

5、適切な量の転化された感受性細胞を採取し、対応する抗生物質を含むSOCまたはLBプレートを塗布し、37℃で12〜16時間逆培養した。塗布量は具体的な実験に基づいて調整することができ、例えば転化DNAの総量が多く、100 ul程度の転化産物塗布板を取ることができる、逆に、形質転換されたDNAの総量が少ない場合、200〜300 ulの形質転換産物塗布板を取ることができる。過剰な菌液は細菌の成長を抑制することができる。予想されるクローンが少ない場合は、遠心分離後に培養液の一部を吸引除去し、菌体を懸濁した後に平板に塗布することができる。残りの菌液を塗布すると4℃で保存でき、翌日の転化コロニー数が少なすぎる場合は、残りの菌液を新たな平板に再塗布することができる。

注意事項

1、感受性細胞は-70℃に保存し、繰り返し凍結融解してはならず、そうしないと転化効率が低下する。

2、実験過程において厳格な無菌操作を行い、他のDNA或いは雑菌の汚染を防止し、今後のスクリーニング、鑑定に影響を与えないようにしなければならない。

3、転化の場合、転化効率は外因性DNAの濃度に一定の範囲内で比例するが、添加された外因性DNAの量が多すぎるか、体積が大きすぎると転化効率が低下する。変換時のDNA体積は、受容体細胞体積の10分の1未満である。

4、転化率の計算：転化率＝発生コロニーの総数／敷板DNA総量。

5、転化実験が成功しないように、再転化のために部分的な連結産物を残し、損失を最小限に抑えることができる。